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介紹和解釋實(shí)驗(yàn)室儀器的工作原理、操作步驟、維護(hù)保養(yǎng)、技術(shù)規(guī)范、應(yīng)用案例等內(nèi)容
OD600的應(yīng)用
OD600是指在600nm波長(zhǎng)處的吸光度,常常被用于表示細(xì)菌液體培養(yǎng)液中的細(xì)菌濃度。在細(xì)菌連續(xù)培養(yǎng)過(guò)程中,在不同的時(shí)間點(diǎn)檢測(cè)菌液的OD600值,然后以時(shí)間為橫坐標(biāo),OD600為縱坐標(biāo),描繪細(xì)菌的生長(zhǎng)曲線。結(jié)合生長(zhǎng)曲線,可以評(píng)估細(xì)菌所處的生長(zhǎng)階段,進(jìn)而可以確定合適的誘導(dǎo)表達(dá)或收獲的時(shí)間點(diǎn)。
OD600的檢測(cè)原理
菌液是一種非均相的懸濁液,當(dāng)入射光照射在菌液上時(shí),光線被細(xì)菌(菌體)所散射,所以儀器檢測(cè)到的“吸光度”實(shí)際上是由散射和吸收綜合作用產(chǎn)生的,而不是如均相溶液中一般是由于溶質(zhì)分子光吸收引起的。
當(dāng)使用不同型號(hào)的設(shè)備來(lái)檢測(cè)同一樣本的吸光度時(shí),可能會(huì)得到不同的OD600,這與儀器的光路設(shè)計(jì)有關(guān)。儀器的檢測(cè)器與樣本之間的距離(d)和檢測(cè)器的大小(R)都會(huì)對(duì)吸光度產(chǎn)生影響。如圖2所示,當(dāng)檢測(cè)器位于d1時(shí),散射光可以被檢測(cè)器接收到,此時(shí)吸光度較小,而當(dāng)檢測(cè)器位于d2時(shí),光不能被檢測(cè)器接收到,此時(shí)吸光度較大。
使用不同的設(shè)備檢測(cè)OD600
不同設(shè)備檢測(cè)到的OD600不能直接比較。如圖3所示,使用5個(gè)型號(hào)的設(shè)備(Biomat3,ND 2000 A,ND 2000 B,Genesys,Beckman DU530)分別對(duì)不同稀釋倍數(shù)(X1,X2,X5,X10)的樣本進(jìn)行OD600檢測(cè)。結(jié)果顯示不同的設(shè)備對(duì)同一樣本的OD600檢測(cè)值不一樣。如果需要比較不同設(shè)備間的OD600值,需要先確定相同樣品在不同設(shè)備上檢測(cè)得到的吸光度值之間的恒定偏差或者比率,然后進(jìn)行校準(zhǔn)。
因此當(dāng)進(jìn)行細(xì)菌菌株篩選、培養(yǎng)基優(yōu)化、添加劑評(píng)估等需要比較微生物生長(zhǎng)曲線的研究工作時(shí),最好選擇同一型號(hào)的設(shè)備進(jìn)行實(shí)驗(yàn),保證實(shí)驗(yàn)條件的一致性。
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